الفرق الرئيسي - بلانت مقابل ربط نهاية مثبت

نوكلياز المقيدة هي إنزيمات محددة تقطع الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل (dsDNA). تُعرف أيضًا باسم المقص الجزيئي في البيولوجيا الجزيئية. تكون إنزيمات التقييد قادرة على التعرف على تسلسلات قصيرة محددة من dsDNA المعروفة باسم مواقع التعرُّف وتشقُّق فوسفات الكبريت والروابط الهيدروجينية لفتح فروع مزدوجة. نتيجة لانقسام هذه الأنزيمات ، يتم إنتاج شظايا الحمض النووي بأنواع مختلفة من النهايات مثل النهايات اللاصقة والنهايات الحادة. ligase DNA هو إنزيم يستخدم في البيولوجيا الجزيئية للانضمام إلى شقين متجاورين من الحمض النووي من خلال تكوين روابط جديدة. تُعرف هذه الخطوة باسم الربط ، ووفقًا لنوع نهاية الحمض النووي المربوط ، يمكن الإشارة إليها باسم ربط الطرف غير المباشر والربط النهائي اللاصق. يتمثل الاختلاف الرئيسي بين ربط الطرف اللاصقة والربط اللزج في أن ربط الطرف غير المباشر يحدث بين شظايا الحمض النووي التي تحتوي على نهايتي حادة بينما يحدث ربط الطرف اللاصق بين 5 و 3. مقارنة مع ربط نهاية حادة ، ربط نهاية لزجة هو أكثر كفاءة واستقرار.

المحتويات 1. نظرة عامة والفرق الرئيسي 2. ما هو الربط بين بلانت 3. ما هو ربط نهاية مثبت 4. جنبا إلى جنب مقارنة - بلانت مقابل ربط نهاية مثبت 5. ملخص

ما هو ربط بلانت النهاية؟

يمكن لبعض نوكلياز المقيدة أن تقطع الدنا في القواعد المعاكسة وتنتج شظايا دنا حادة. تُعرف هذه الإنزيمات باسم قواطع نهاية حادة. يلتصقون مباشرة إلى منتصف موقع التقييد دون ترك قواعد متدلية تقطعت بهم السبل. تُعرف أطراف Blunt أيضًا بأنها نهايات غير متدلية نظرًا لعدم وجود قواعد متدلية 3 و 5 في الأطراف. كلا الخيوط إنهاء من أزواج قاعدة في نهايات حادة. إنزيمات القطع الحادة الشائعة هي EcoRV HaeIII و AluI و SmaI.

وتشارك ربط حادة النهاية بين طرفين حادة. إنها ليست ربطًا لقواعد بارزة. هذا الربط أقل كفاءة من ربط نهاية لزجة. ومع ذلك ، في بعض الحالات ، يصبح ربط الطرف غير المباشر أكثر فائدة من ربط الطرف اللاصق ، خاصة عند ربط منتجات PCR. يتم إنتاج منتجات PCR دائمًا بنهايات حادة. لا يتطلب ربط النهاية الحادة نهايات تكميلية في الحمض النووي لعملية الربط.

ما هو ربط نهاية لزجة؟

بعض نوكلياز المقيد قادرون على قطع dsDNA ، تاركين قطعة متدلية من الحمض النووي المفرد الذين تقطعت بهم السبل في النهاية. تُعرف هذه الغايات بنهايات لاصقة أو متدلية. يحدث ربط النهاية اللاصقة بين شظايا الحمض النووي التي تحتوي على متراكبة متطابقة لأن النهايات اللاصقة تمتلك قواعد غير متزاوجة وتتطلب قواعد تكميلية لتشكيل روابط. وبالتالي ، من الضروري استخدام نفس إنزيم التقييد لكلا مصدري الحمض النووي لإنتاج شظايا الربط المطابقة.

ربط النهاية اللزجة أكثر كفاءة وغالبًا ما يكون مرغوبًا للغاية في عمليات الاستنساخ. هناك العديد من الأنزيمات المقيدة التي تنتج نهايات لاصقة. هم EcoRI ، BamHI ، HindIII ، إلخ.

ما هو الفرق بين Blunt و Sticky End Ligation؟

ملخص - بلانت مقابل ربط نهاية مثبت

يمكن أن تكون نوكلويات التقييد قادرة على الالتصاق بالـ dsDNA وإنتاج شظايا DNA ذات نهايات مختلفة. يتعرفون على تسلسلات محددة ويقيدون الحمض النووي الذي يخلق نهايات لزجة وحادة. النهايات اللاصقة لها قواعد غير محددة في نهاية الأجزاء. يتم إنشاء نهايات Blunt بسبب انقسام مستقيم ولديهم أزواج قاعدة في النهايات. ربط نهاية لزجة يتطلب اثنين من قطع الحمض النووي واحدة تقطعت بهم السبل الحمض النووي. يحدث ربط نهاية كليلة بين أي شظايا نهاية حادة. هذا هو الفرق بين الربط الحاد واللزج.

المراجع: 1. روبرتس ، ريتشارد ج. "كيف أصبحت إنزيمات التقييد هي مؤلفي البيولوجيا الجزيئية." وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم. العلوم الوطنية أكاد ، الشبكة العالمية. 12 أبريل 2017 2. عدنان ، آمنة. استخدامات تقييد الانزيمات في التكنولوجيا الحيوية. Np ، الثانية على شبكة الإنترنت. 12 أبريل 2017

الصورة مجاملة: 1. "EcoRV Restriction Site.rsh" بقلم Ramin Herati - تم إنشاؤه باستخدام Inkscape (المجال العام) عبر Commons Wikimedia 2. "Restriction enzyme Eco RI" بقلم Tinastella - العمل الخاص (المجال العام) عبر ويكيميديا ​​كومنز